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1從主辦第十四屆ISBT國際血小板免疫學(xué)研討會(huì)和國際

合作研究項(xiàng)目實(shí)施的結(jié)果看我國的差距按國際血小板免疫學(xué)工作組的要求，第十四屆ISBT國際血小板免疫學(xué)研討會(huì)和國際合作研究項(xiàng)目，主要圍繞當(dāng)前國際血小板免疫學(xué)診斷技術(shù)中的2大主題———血小板抗體的檢測和特異性鑒定以及血小板特異性抗原基因定型技術(shù)———在臨床應(yīng)用中所出現(xiàn)的技術(shù)難題，組織、設(shè)計(jì)和實(shí)施的國際合作研究。其組織和設(shè)計(jì)的研究項(xiàng)目中，共有2個(gè)血小板血清學(xué)的抗體檢測項(xiàng)目、2個(gè)血小板抗原基因分型項(xiàng)目和1個(gè)藥物依賴性血小板抗體檢測項(xiàng)目。由于此次國際血小板免疫學(xué)合作項(xiàng)目首度由中國學(xué)者主辦，因而有7家國內(nèi)血小板免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室參加，不但創(chuàng)下了該項(xiàng)目推出以來的歷史記錄，而且在這項(xiàng)國際血小板免疫學(xué)界最有學(xué)術(shù)地位的合作活動(dòng)中增加了中國血小板免疫學(xué)界的影響。但是在整個(gè)項(xiàng)目實(shí)施過程中，中國實(shí)驗(yàn)室所體現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)能力和質(zhì)量水平與國際水平差距甚大，與主辦國應(yīng)有的實(shí)力相差甚遠(yuǎn)，以致出現(xiàn)了頗為尷尬結(jié)局:7個(gè)中國實(shí)驗(yàn)室中僅1家參加和完成了全部5個(gè)合作研討項(xiàng)目，其余6個(gè)實(shí)驗(yàn)室，有1家只參加了血小板血清學(xué)抗體檢測項(xiàng)目、5家均只參加血小板基因分型項(xiàng)目;在最終提交合作研究結(jié)果時(shí)，1家實(shí)驗(yàn)室是白卷，在1項(xiàng)旨在檢測各參加實(shí)驗(yàn)室的HPA的基因分型能力和質(zhì)量比對(duì)的項(xiàng)目中，有1家實(shí)驗(yàn)室錯(cuò)誤率為37.50%，而42家國際實(shí)驗(yàn)室的平均錯(cuò)誤率僅2.15%。這些數(shù)據(jù)在一定程度上反映了我國血小板免疫學(xué)專業(yè)工作的實(shí)際水平。

2國際上血小板免疫學(xué)學(xué)科近年來取得的杰出成績給我們帶來的思考

自從在1959年鑒定和報(bào)道了第1個(gè)HPA至今，目前已有屬于HPA-1～28bw系統(tǒng)的34個(gè)HPA經(jīng)人血清免疫抗體鑒定和基因結(jié)構(gòu)確認(rèn)后被正式命名，其中11個(gè)新抗原(HPA-18bw～28bw)由德、法、英和美國等歐美國家在2009～2013年分別發(fā)現(xiàn)和報(bào)道，隨后這些HPA新抗原和相應(yīng)的分子特征、抗原定位和編碼基因的遺傳結(jié)構(gòu)以及對(duì)臨床的意義都被很快地證實(shí)和闡明。這些國家的血小板免疫學(xué)工作者所以能獲得如此豐富的成果，可能得益以下的一些原因:

2.1臨床工作者對(duì)血小板免疫學(xué)高度重視，臨床科室和血小板免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室密切結(jié)合這些國家的血小板免疫學(xué)知識(shí)已十分普及，相關(guān)的臨床診斷工作已成常規(guī)，臨床醫(yī)護(hù)人員對(duì)各類患者血小板免疫異常的癥狀很警惕;而且臨床科室與血小板免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室聯(lián)系十分密切，能及時(shí)發(fā)現(xiàn)血小板免疫異常的案例并送實(shí)驗(yàn)室作血小板免疫學(xué)檢測，患者的疾病由此能及時(shí)地確認(rèn)和得到正確治療。在這樣的條件下，實(shí)驗(yàn)室也能同時(shí)源源不斷地獲得大量珍貴的血小板免疫異常的標(biāo)本，為新的發(fā)現(xiàn)和成果創(chuàng)造了極好的條件。

2.2實(shí)驗(yàn)室能因地制宜地建立和熟練應(yīng)用各種血小板免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)和方法，有效和正確地對(duì)血小板免疫異常的標(biāo)本檢測和鑒定目前國際通用的檢測血小板抗原、抗體的免疫血清學(xué)檢測技術(shù)有血小板抗原單克隆抗體特異性免疫固定試驗(yàn)(monoclonalantibody-specificimmobilizationofplate-letantigensassay，MAIPA)、抗原捕獲酶聯(lián)試驗(yàn)(antigencap-ture-enzyme-linkedimmunosorbentassay，ACE)、改良抗原捕獲酶聯(lián)試驗(yàn)(modifiedantigencapture-enzyme-linkedimmunosor-bentassay，MACE)、混合被動(dòng)紅細(xì)胞凝集(mixedpassivehe-magglutination，MPHA)、固相紅細(xì)胞粘附試驗(yàn)(solid、phaseredcelladherenceassay，SPAA)和流式細(xì)胞熒光免疫檢測(plateletimmunouorescencetest-flowcytometry，PIFT-FFC)等;血小板抗原基因分型技術(shù)有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)序列特異引物(SSP)、實(shí)時(shí)定量PCR、基因芯片、血小板基因序列(SBT)以及免疫熒光微球等技術(shù)。這些技術(shù)中，包括“金牌方法”MAIPA在內(nèi)都各有長短，只用單一技術(shù)和方法，有時(shí)難以得到正確和及時(shí)的檢測結(jié)果，商業(yè)化試劑盒更無法完全符合實(shí)驗(yàn)室的需要。國際上先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)室，通常已按照本地區(qū)人群和民族的特點(diǎn)和條件，完整地建立各類實(shí)驗(yàn)技術(shù)，并將實(shí)驗(yàn)操作程序標(biāo)準(zhǔn)化。在實(shí)際操作時(shí)，按不同的標(biāo)本特點(diǎn)，用不同的方法對(duì)照檢測結(jié)果，以免漏檢或誤檢;因此具備檢測和鑒定新抗體，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)新抗原的能力。

2.3分子生物學(xué)技術(shù)的建立和應(yīng)用，加速了HPA新抗原的分子和基因結(jié)構(gòu)的研究和發(fā)現(xiàn)國際血小板命名委員會(huì)(PlateletNomenclaturecommittee，PNC)規(guī)定:接受1個(gè)HPA新抗原的命名，除了要有完整的血清學(xué)數(shù)據(jù)外，還必須有相應(yīng)的分子和基因結(jié)構(gòu)的數(shù)據(jù)。由于基因克隆、序列分析、基因定位、基因轉(zhuǎn)錄和各類細(xì)胞工程技術(shù)的普及和應(yīng)用，為新抗原的發(fā)現(xiàn)和報(bào)道，提供了充分的技術(shù)基礎(chǔ)。

3推動(dòng)我國血小板免疫學(xué)學(xué)科建設(shè)和發(fā)展的建議

3.1工作重點(diǎn)問題血小板免疫學(xué)的關(guān)鍵性技術(shù)是血小板抗體的檢測技術(shù)，但是目前國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室對(duì)建立自身的血小板抗體檢測技術(shù)不夠重視，工作重點(diǎn)往往是放在血小板抗原基因分型、建立血小板抗原基因數(shù)據(jù)庫上。血小板免疫學(xué)學(xué)科工作應(yīng)首先具備對(duì)血小板抗體檢測的能力，這是為臨床提供服務(wù)的基礎(chǔ)，也是進(jìn)一步推動(dòng)血小板免疫學(xué)學(xué)科發(fā)展的源頭，要解決包括各類血小板免疫異常、為臨床患者提供涉及血小板的血液和輸血治療服務(wù)以及開展相關(guān)的科學(xué)研究等問題，都必須以血小板抗體的正確檢測為起點(diǎn)。按本地區(qū)人群的特點(diǎn)，建立完整和經(jīng)得起考核的血小板抗體檢測技術(shù)，是每個(gè)血小板免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室的基本要求。

3.2認(rèn)識(shí)中國的血小板免疫學(xué)工作有自身的民族和群體特異性的特征，不盲目遵循國外的研究報(bào)道國內(nèi)的血小板免疫學(xué)工作者迄今多仍在沿襲國外學(xué)者的觀點(diǎn)來考慮問題，而對(duì)血小板抗原和基因的多態(tài)性分布的種族和群體特異性的特點(diǎn)不夠重視，易使相關(guān)的工作走向誤區(qū)。由于不同人群、種族和地區(qū)間的血小板各個(gè)抗原的頻率有可能不同，導(dǎo)致血小板免疫抗體產(chǎn)生的特點(diǎn)或許有差異，引發(fā)的血小板免疫性疾病的機(jī)會(huì)也有差異，因此在臨床檢測中，對(duì)不同的人群的血小板抗體檢測要各有所側(cè)重，不能一概按文獻(xiàn)報(bào)道的觀點(diǎn)工作。例如很多文獻(xiàn)都強(qiáng)調(diào)抗-HPA-1檢測的重要性，而且認(rèn)為亞洲地區(qū)，應(yīng)參照日本人群特別重視抗-HPA-4的檢測;事實(shí)上在白種(高加索)人群中重視抗-HPA-1的檢測和日本人群中重視抗-HPA-4的檢測是正確的，這是他們?nèi)巳旱腍PA基因分布和結(jié)構(gòu)特征所決定。但是在中國人群中，因?yàn)檠“蹇乖鄳B(tài)性的分布特征與白種和日本人群有差別，開展抗-HPA-1和-4的檢測可能是沒有必要的。中國人群的HPA-1b基因頻率明顯低于白種人群、HPA-4b基因頻率明顯低于日本人群，至今未在中國人群中發(fā)現(xiàn)抗-HPA-1和-4。按中國人群HPA多態(tài)性頻率分布和同種異型抗原雜合度的情況，抗-HPA-3、-5和-15將是有較大可能性出現(xiàn)的HPA的特異性抗體，國內(nèi)已有抗-HPA-3a的報(bào)道，因此臨床和實(shí)驗(yàn)室的思考及檢測方法學(xué)上可以將這方面置于重點(diǎn)。

3.3重視中國人群CD36缺失性個(gè)體產(chǎn)生抗-CD36導(dǎo)致其介導(dǎo)免疫性血小板減少癥的種族特征CD36又名血小板糖蛋白Ⅳ(GPⅣ)、Naka、GP88、GPⅢbFAT或SCARB3;CD36蛋白能作為同種異體免疫性抗原(isoantigen)，通過輸血、妊娠、骨髓移植等途徑，對(duì)CD36缺失的個(gè)體，產(chǎn)生抗-CD36同種抗體(isoantibody)，從而能導(dǎo)致免疫性的血小板輸注無效、輸血后紫癜、新生兒免疫性血小板減少癥等血小板免疫異常性疾病。亞洲人特別是在中國人群中，CD36缺乏較高的發(fā)生率，國內(nèi)深圳和廣州地區(qū)人群分別3.19%和2.81%，廣西不同民族人群中的平均發(fā)生率為4.13%，其中壯族人群高達(dá)5.76%，在廣西的CD36缺乏人群中已發(fā)現(xiàn)了7個(gè)CD36新突變基因，并已在臨床上檢測到多例抗-CD36介導(dǎo)的血小板同種免疫減少的病例。因此，CD36對(duì)于中國人群而言，是1個(gè)很重要、能導(dǎo)致血小板同種異體免疫反應(yīng)(isoimmunization)的有特色的抗原，對(duì)于血小板同種免疫減少性疾病的診斷、預(yù)防和治療，都有十分重要的意義，中國以致亞洲地區(qū)的血小板免疫學(xué)工作者，應(yīng)對(duì)CD36缺乏者可能因抗-CD36產(chǎn)生而介導(dǎo)血小板免疫減少癥的問題給與特殊的注意。在臨床遇到血小板同種免疫減少性病例時(shí)，除考慮HPA及HLA等的免疫因素外，應(yīng)對(duì)抗-CD36介導(dǎo)的同種免疫反應(yīng)而產(chǎn)生的血小板免疫異常予以重視，并給予針對(duì)性的診斷和治療。

3.4重視血小板免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測能力的建設(shè)要結(jié)合本地區(qū)人群的特點(diǎn)，增強(qiáng)專業(yè)人才和實(shí)驗(yàn)室的基本建設(shè)，努力拓展血小板免疫學(xué)的血清學(xué)和分子生物學(xué)的檢測能力。重點(diǎn)應(yīng)注意以下方面工作:

1)鑒于一些血小板抗原和抗體的反應(yīng)特征可能會(huì)造成假陰性或假陽性結(jié)果，在對(duì)血小板特異性抗體的檢測和鑒定時(shí)需要使用多種血清學(xué)試驗(yàn)作綜合分析;

2)涉及到如抗-HPA-3、-5和-15檢測時(shí)，因所用的譜細(xì)胞上相應(yīng)抗原表達(dá)量會(huì)影響檢測結(jié)果，建議檢測時(shí)使用抗原純合子和新鮮的血小板;

3)MAIPA試驗(yàn)中所使用的各類特異性血小板糖蛋白單克隆抗體(monoclonalantibodies，MoAb)，涉及到檢測抗-HPA時(shí)的特異性和敏感性問題，正確選擇和使用是成功檢測的關(guān)鍵，建議實(shí)驗(yàn)室在建立自己實(shí)驗(yàn)室的血小板配組細(xì)胞(譜細(xì)胞，panelcell)時(shí)，為避免不同的MoAb有可能會(huì)對(duì)所針對(duì)的抗原決定簇存在差異以及人抗-HPA與鼠MoAb間的立體競爭等因素帶來的假陰性問題，也需要建立適用于各類血小板抗體的配組單克隆抗體(panelMoAbs)，這也是當(dāng)前國際上先進(jìn)的血小板免疫實(shí)驗(yàn)室的基本要求;

4)HPA的基因分型技術(shù)適用于高通量的HPA分型工作，但在遇到罕見的抗原或抗原有突變產(chǎn)生時(shí)，由于所應(yīng)用的基因分型技術(shù)在特異性探針或引物設(shè)計(jì)上的缺陷，會(huì)對(duì)標(biāo)本不能正確的檢測，因此綜合使用多種基因分型技術(shù)并相互比對(duì)，對(duì)基因分型結(jié)果的正確判讀會(huì)有所幫助;

5)對(duì)市場上開發(fā)和提供的商業(yè)化試劑，應(yīng)謹(jǐn)慎地使用，需要求試劑供應(yīng)商提供完整的質(zhì)量認(rèn)證文件，以免出現(xiàn)人為的差錯(cuò)和困惑。此外，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡可能建立和具備各類抗原和抗體的參比標(biāo)本以及質(zhì)控標(biāo)本，這將對(duì)血小板免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室掌握和拓展技術(shù)以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確性十分有幫助。

3.5建立有效機(jī)制，開展學(xué)術(shù)交流和合作工作，努力提高血小板免疫學(xué)學(xué)科工作的技術(shù)水平國際血小板免疫學(xué)專業(yè)界通過定期主辦國際血小板免疫學(xué)研討會(huì)和合作研究項(xiàng)目的活動(dòng)，以達(dá)到提高參加實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)水平、促進(jìn)相互交流和了解的目的，這已被證明是十分有效的學(xué)術(shù)合作和互利活動(dòng)。建議中國的血小板免疫學(xué)專業(yè)人員和實(shí)驗(yàn)室，建立既適合于國內(nèi)條件、又符合國際范式的學(xué)術(shù)合作機(jī)制:通過國內(nèi)、國際間的學(xué)術(shù)合作和交流活動(dòng)，實(shí)施實(shí)驗(yàn)室間的工作和經(jīng)驗(yàn)交流、了解國際和國內(nèi)血小板免疫學(xué)學(xué)科的發(fā)展現(xiàn)狀和方向、交換和獲得所需的參比試劑和質(zhì)控標(biāo)本、推薦或建立國內(nèi)外推廣應(yīng)用的新檢測技術(shù)和技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)一測試和考評(píng)參加活動(dòng)的各實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)狀況和質(zhì)量水平。中國的血小板免疫學(xué)學(xué)科建設(shè)正在迅速發(fā)展。我們堅(jiān)信:中國血小板免疫學(xué)專業(yè)工作者，只要能堅(jiān)持忠于事業(yè)和服務(wù)患者的理念，通過自身不懈地努力和廣泛、深度地開展國內(nèi)外的學(xué)術(shù)合作，不僅能很快縮短中國血小板免疫學(xué)與國際先進(jìn)水平的差距，而且一定能血小板免疫學(xué)學(xué)科的建設(shè)和發(fā)展，做出應(yīng)有的獨(dú)到貢獻(xiàn)!

作者：吳國光申衛(wèi)東單位：南寧輸血醫(yī)學(xué)研究所